期刊简介
本刊是由卫生部主管，中国康复医学会、华西医科大学附属第一医院主办，中国修复重建外科杂志编辑委员会编辑出版的跨学科的医学专业性学术期刊。主要刊登骨科、手外科、显微外科、整形外科、颌面外科、普外科、泌尿外科、神经外科、妇产科、五官科等各临床学科、研究室，无论是采用手术方法进行组织、器官的移植与移位，采用生物制品或非生物制品进行植入或替代，以及采用非手术方法等，进行组织结构的修复、重建功能、改善外形等有关的学术论文、临床经验总结、基础研究、有前瞻性见解的个案报道，有关的新技术、新疗法、经验教训、专题讲座、专题讨论、国外最新文献摘要等。
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首页>中国修复重建外科杂志
- 杂志名称：中国修复重建外科杂志
- 主管单位：中华人民共和国卫生部 计划生育委员会
- 主办单位：中国康复医学会,四川大学
- 国际刊号：1002-1892
- 国内刊号：51-1372/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：四川省首届科技期刊评比编辑加工奖期刊收录：JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), 国家图书馆馆藏, Pж(AJ) 文摘杂志(俄), 上海图书馆馆藏, CA 化学文摘(美), 剑桥科学文摘, 万方收录(中), 哥白尼索引(波兰), 文摘与引文数据库, 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 知网收录(中), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 维普收录(中), 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊)
BMP-2、TGF-β3重组腺病毒载体的构建及其在滇南小耳猪BMSCs中的表达
王鑫；李彦林；金耀峰；陈建明；王慧建；何川；曹树海；赵沣凯
关键词：组织工程软骨, 腺病毒, BMSCs, 基因转染, BMP-2, TGF-β3, 猪
摘要：目的 构建含BMP-2和TGF-β3基因的重组腺病毒载体,双基因共转染滇南小耳猪BMSCs并检测其表达,为组织工程软骨支架提供改良的种子细胞. 方法 用PCR方法扩增人BMP-2和TGF-β3目的基因,将2个基因亚克隆至穿梭载体pEC3.1(+)中,构建pEC-GIE3.1-BMP-2和pEC-GIE3.1-TGF-β3重组质粒,通过体外同源重组反应将pEC-GIE3.1-BMP-2、pEC-GIE3.1-TGF-β3重组至腺病毒骨架质粒pGSadeno中,构建重组腺病毒表达质粒pGSadeno-BMP-2、pGSadeno-TGF-β3,线性化后转染HEK293细胞进行包装,获得重组腺病毒Ad-BMP-2和Ad-TGF-β3.取成年滇南小耳猪的骨髓,采用离心加贴壁法分离BMSCs,分别用基因Ad-BMP-2(A组)、Ad-TGF-β3(B组)和Ad-BMP-2+ Ad-TGF-β3(C组)转染,以未转染细胞作为对照(D组).采用免疫荧光、Western blot、PCR检测目的基因和蛋白表达,Ⅱ型胶原免疫组织化学染色观察成软骨分化情况. 结果 Ad-BMP-2和Ad-TGF-β3经PCR及测序鉴定正确,带BMP-2、TGF-β3基因的载体在HEK293细胞中包装成功,病毒滴度分别为5.6×108、1.6×108 pfu/mL.双基因共转染滇南小耳猪BMSCs 72 h后,PCR示A组在310 bp处可见条带,B组在114 bp处可见条带,C组在310、114 bp处同时可见条带,D组未见目的条带表达;免疫荧光示A、B组细胞质内有分别有红色、绿色荧光表达,C组同时表达红色及绿色荧光,D组未见荧光表达;Western blot示A组在相对分子质量为18×103处有阳性条带,B组在50×103处有阳性条带,C组在18×103、50×103处同时可见条带,D组未见目的条带表达.Ⅱ型胶原免疫组织化学染色示A、B、C组呈阳性,C组染色强于A、B组,D组染色呈阴性. 结论 成功构建含BMP-2和TGF-β3基因的重组腺病毒载体.Ad-BMP-2和Ad-TGF-β3双基因联合转染滇南小耳猪BMSCs后目的基因和蛋白均可成功表达,并促进BMSCs成软骨分化,可作为组织工程软骨研究的改良种子细胞.
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