期刊简介
本刊是由卫生部主管，中国康复医学会、华西医科大学附属第一医院主办，中国修复重建外科杂志编辑委员会编辑出版的跨学科的医学专业性学术期刊。主要刊登骨科、手外科、显微外科、整形外科、颌面外科、普外科、泌尿外科、神经外科、妇产科、五官科等各临床学科、研究室，无论是采用手术方法进行组织、器官的移植与移位，采用生物制品或非生物制品进行植入或替代，以及采用非手术方法等，进行组织结构的修复、重建功能、改善外形等有关的学术论文、临床经验总结、基础研究、有前瞻性见解的个案报道，有关的新技术、新疗法、经验教训、专题讲座、专题讨论、国外最新文献摘要等。
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首页>中国修复重建外科杂志
- 杂志名称：中国修复重建外科杂志
- 主管单位：中华人民共和国卫生部 计划生育委员会
- 主办单位：中国康复医学会,四川大学
- 国际刊号：1002-1892
- 国内刊号：51-1372/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：四川省首届科技期刊评比编辑加工奖期刊收录：JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), 国家图书馆馆藏, Pж(AJ) 文摘杂志(俄), 上海图书馆馆藏, CA 化学文摘(美), 剑桥科学文摘, 万方收录(中), 哥白尼索引(波兰), 文摘与引文数据库, 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 知网收录(中), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 维普收录(中), 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊)
可诱导表达hBMP-2的慢病毒载体构建及其在人脐血间充质干细胞中的表达
周明；石新艳；田少奇；王丽；张积华；孙康；邢士超；孙伟雪；黄洪杰；吴丹
关键词：可诱导慢病毒载体, hBMP-2, Tot-on系统, 人脐血间充质干细胞, 强力霉素
摘要：目的 构建可诱导表达hBMP-2的慢病毒载体,并研究hBMP-2在人脐血间充质干细胞(human umbilical cord blood mesenchymal stem cells,HUMSCs)中的可诱导性表达.方法 以pcDNA-hBMP-2为模板,通过PCR反应获取hBMP-2,运用GATEWAY技术构建pLV/EXPN2-Neo-TRE-hBMP-2、pLV/EXPN2-Puro-EFIA-反向反式激活因子(reverse transactivator,rtTA),通过PCR鉴定重组慢病毒载体构建.将重组慢病毒与辅助质粒共同转染293FT细胞,包装成能表达hBMP-2的可控性慢病毒,并测定病毒滴度.用病毒转染HUMSCs,使用强力霉素进行诱导,分别在相同诱导时间(48 h)不同诱导浓度(0、10、100 ng/mL,1、10、100μg/mL)及不同诱导时间(12、24、48、72 h)相同诱导浓度(10μg/mL)两种情况下用ELISA法测定hBMP-2的表达情况.对转染前后的HUMSCs进行成骨诱导,用茜素红染色法观察矿化物结节形成情况.结果 成功构建了携带hBMP-2的可控性慢病毒载体pLV/EXPN2-Neo-TRE-hBMP-2、pLV/EXPN2-Puro-EF1A-rtTA,并获得相应的病毒,病毒滴度分别为3.5×108TU/mL和9.5×107TU/mL;病毒转染HUMSCs后,HUMSCs可通过强力霉素的诱导可控性表达hBMP-2.在相同诱导时间情况下,强力霉素10μg/mL时诱导表达强;而在相同诱导浓度下,hBMP-2的表达在诱导48 h达峰值.HUMSCs成骨诱导培养2周后,茜素红染色示胞浆中有大量红色的钙化基质沉积.结论 通过GATEWAY技术可以建立携带hBMP-2目的 基冈的可控性慢病毒载体,为进一步研究hBMP-2诱导HUMSCs成骨分化治疗骨坏死模型奠定实验基础,并提供了一种新的实验思路.
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