期刊简介
本刊是由卫生部主管，中国康复医学会、华西医科大学附属第一医院主办，中国修复重建外科杂志编辑委员会编辑出版的跨学科的医学专业性学术期刊。主要刊登骨科、手外科、显微外科、整形外科、颌面外科、普外科、泌尿外科、神经外科、妇产科、五官科等各临床学科、研究室，无论是采用手术方法进行组织、器官的移植与移位，采用生物制品或非生物制品进行植入或替代，以及采用非手术方法等，进行组织结构的修复、重建功能、改善外形等有关的学术论文、临床经验总结、基础研究、有前瞻性见解的个案报道，有关的新技术、新疗法、经验教训、专题讲座、专题讨论、国外最新文献摘要等。
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首页>中国修复重建外科杂志
- 杂志名称：中国修复重建外科杂志
- 主管单位：中华人民共和国卫生部 计划生育委员会
- 主办单位：中国康复医学会,四川大学
- 国际刊号：1002-1892
- 国内刊号：51-1372/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：四川省首届科技期刊评比编辑加工奖期刊收录：JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), 国家图书馆馆藏, Pж(AJ) 文摘杂志(俄), 上海图书馆馆藏, CA 化学文摘(美), 剑桥科学文摘, 万方收录(中), 哥白尼索引(波兰), 文摘与引文数据库, 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 知网收录(中), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 维普收录(中), 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊)
神经元差速贴壁纯化及影响因素分析
李骏；冯大雄；黄贻泽；叶飞
关键词：背根神经节神经元, 差速贴壁纯化, FBS, 五氟尿嘧啶, 阿糖胞苷, 大鼠
摘要：目的 神经元纯化是各种神经细胞实验研究必不可少的实验步骤,但目前少见神经元纯化过程中各种因素对神经轴突影响的实验报道.探讨简便有效的背根神经节神经元(dorsal root ganglion neurons,DRGn)细胞纯化方法和神经元培养体系内相关因素对β3-tubulin阳性神经轴突生长状态的影响. 方法 取新生3d的SD大鼠背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)制成细胞悬液,根据玻片包被底物不同分为D-多聚赖氨酸(poly-D-lysine,PDL)组、PDL/层粘连蛋白(Laminin,LN)组和Ⅰ型胶原(collagen Ⅰ,Col Ⅰ)组,分别差速贴壁10、20、30、40、50、60、70、80、90、100 min,倒置相差显微镜观察细胞贴壁情况,并采用免疫荧光染色观察各时间点DRGn细胞和非DRGn细胞贴壁数量.将DRG制备组织块培养72 h,采用完全随机设计的方法观察底物(PDL、PDL/LN、Col Ⅰ)、FBS(0、5%、10%)、五氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-Fu,0、20、40 μmol/L)和阿糖胞苷(cytrambine,Ara-C,0、10、20 μmol/L)不同水平对DRG整节培养中β3-tubulin阳性轴突长度和单位阳性轴突分支末梢数量的影响. 结果 倒置相差显微镜和倒置荧光显微镜观察显示,细胞接种后即开始贴壁,贴壁10 min后移除细胞悬液仍可见DRGn细胞及非DRGn细胞贴壁生长.PDL组:贴壁10、30 min,神经元特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE)阴性(NSE~-)细胞数高于NSE~+细胞数(P<0.05);贴壁80、90、100 min,NSE~+细胞数大于NSE~-细胞数(P<0.05).PDL/LN组:贴壁10、20、30、40、50 min,NSE~+细胞数及NSE~-细胞数差异无统计学意义(P>0.05);贴壁60、70、80、90、100 min,NSE~+细胞数大于NSE~-细胞数(P<0.05).Col Ⅰ组:贴壁10～40 min,NSE~-细胞数大于NSE~+细胞数,但差异无统计学意义(P>0.05);贴壁70、80、90、100 min,NSE~+细胞数大于NSE~-细胞数(P<0.05).DRG整节培养72 h后,底物水平为PDL/LN时轴突生长分化好,与PDL水平和Col Ⅰ水平比较差异有统计学意义(P<0.05);FBS为5%水平时β3-tubulin单位阳性轴突分支末梢数大(P<0.05),但阳性轴突长度在0、5%和10%3个浓度水平比较差异无统计学意义(P>0.05);5-Fu在0浓度水平时β3-tubulin单位阳性轴突分支末梢数及阳性轴突长度均大,与20、40 μmol/L浓度水平比较差异有统计学意义(P<0.05);Ara-C在0和10μmol/L浓度水平的阳性轴突分支末梢数相同,均高于20 μmol/L水平(P<0.05);而阳性轴突长度在10 μmol/L水平时长,与0和20μmol/L浓度比较差异有统计学意义(P<0.05). 结论 将DRGn细胞悬液在PDL包被的玻片上差速贴壁30 min,再将悬液吸出进行接种培养,可在一定程度上起到分离纯化神经元细胞的作用.行DRG整节培养时,选择神经元专用培养基联合PDL/LN细胞培养底物和10 μmol/L Ara-C,可获得理想的β3-tubulin阳性轴突生长分化效果.
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